Jaký je rozdíl mezi nitrocelulózou a PVDF membránou

Zatímco pro Western blot a analýzu aminokyselin se používají membrány nitrocelulózy i PVDF, nitrocelulóza je ideální pro detekci proteinů s nízkou molekulovou hmotností, zatímco PVDF je vhodnější pro detekci proteinů s vyšší molekulovou hmotností..

1. Co je to nitrocelulózová membrána?
2. Co je to PVDF membrána?
3. Jak používáte nitrocelulózovou membránu?
4. Může protein procházet membránou PVDF?
5. Jaké jsou výhody a nevýhody PVDF a nitrocelulózových membrán?
6. Na co se používá nitrocelulóza?
7. Jak udržujete PVDF membrány?
8. Co znamená PVDF?
9. Jak se nanáší PVDF povlak?
10. Jaká je velikost pórů nitrocelulózy?
11. Proč namočíte PVDF membránu do methanolu?
12. Proč byl nutný přenos na PVDF membránu?

Co je to nitrocelulózová membrána?

Nitrocelulózové membrány jsou populární matricí používanou při blotování proteinů kvůli jejich vysoké vazebné afinitě k proteinům, kompatibilitě s různými detekčními metodami (chemiluminiscence, chromogenní a fluorescence) a schopnosti imobilizovat proteiny, glykoproteiny nebo nukleové kyseliny.

Co je to PVDF membrána?

Membrány z polyvinylidenfluoridu (PVDF) váží biomolekuly prostřednictvím hydrofobních interakcí. Membránové póry zvyšují povrchovou vazebnou oblast a omezují velikost vázaných proteinů. ... Má vyšší kapacitu vázání proteinů a vyšší retenci než 0,45 µm membrány.

Jak používáte nitrocelulózovou membránu?

Nitrocelulóza - umístěte membránu na několik minut přímo do mělké misky obsahující 50 ml 1X přenosového pufru. Filtrační papír - filtrační papír krátce před použitím krátce namočte do 1X přenosového pufru. Gel - gel použijte ihned po běhu.

Může protein procházet membránou PVDF?

50-60%, protože mohou skutečně projít přenosovou membránou a ztratit se. U větších bílkovin byste měli snížit procento gelu, abyste zvýšili mobilitu bílkovin. ... Můžete také provést jednoduchý test průniku bílkovin umístěním druhé membrány za primární membránu.

Jaké jsou výhody a nevýhody PVDF a nitrocelulózových membrán?

PVDF má kapacitu vazby na proteiny 170 až 200 μg / cm² zatímco nitrocelulóza má vazebnou kapacitu pro proteiny 80 až 100 μg / cm². Protože PVDF má vyšší kapacitu vazby na bílkoviny, nabízí také vyšší citlivost.

Na co se používá nitrocelulóza?

Guncotton nebo nitrocelulóza (také známá jako trinitrocelulóza a dusičnan celulózy) je mírná výbušnina, která se používá v raketách, pohonných látkách, základnách tiskařských barev, povrchové úpravě kůže a celuloidech (směs nitrocelulózy a kafru; nejprve se používá k výrobě kulečníkových koulí).

Jak udržujete PVDF membrány?

Aby bylo možné PVDF membrány dlouhodobě skladovat, měly by být naskládány do biologicky nerozložitelného materiálu o teplotě ~ 4 ° C. Za zmínku stojí, že membrány musí být před uskladněním úplně vysušeny.

Co znamená PVDF?

PVDF je zkratka pro polyvinylidenfluorid, který lze také označit jako PVF2. Tento polymer je součástí třídy materiálů známých jako fluorované uhlovodíky nebo fluorované polymery, které se vyznačují vysokou tepelnou stabilitou a vynikající chemickou odolností.

Jak se nanáší PVDF povlak?

Stříkání PVDF používá membránové čerpadlo nebo pístové čerpadlo k aplikaci tlaku a statické elektřiny pro stříkání. Práškový povlak se nastříká třepáním nebo vdechováním a elektrostatický prášek se nastříká na ústa pistole. Sušení PVDF může být jak přirozené vyrovnání, tak i pečení.

Jaká je velikost pórů nitrocelulózy?

Nitrocelulózová membrána Bio-Rad s velikostí pórů 0,2 µm je hustá 100% nitrocelulóza. Čistá nitrocelulóza je nejčastěji používanou membránou pro přenos proteinů i nukleových kyselin.

Proč namočíte PVDF membránu do methanolu?

Krátké opláchnutí (15–30 sekund) v methanolu (nebo jiném 100% alkoholu (ethanolu nebo isopropanolu)) před Westernovým přenosem „hydratuje“ membránu a umožní lepší přenos a vazbu na protein. Nitrocelulózové membrány jsou hydrofilní, takže je lze plně hydratovat vodnými pufry.

Proč byl nutný přenos na PVDF membránu?

Po dokončení elektroforézy musí být proteiny přeneseny z gelu na vhodnou membránu pro barvení a detekci protilátek. PVDF je obecně lepší pro nízkomolekulární proteiny. ... Tuto membránu lze zakoupit v různých velikostech pórů.