Differbetween
Postup
- Odstraňte médium z kultivační nádoby aspirací a promyjte monovrstvu solným roztokem bez Ca2+ a Mg2+ odstranit všechny stopy séra. ...
- Naneste dostatečné množství trypsinu nebo roztoku trypsinu / EDTA do kultivační nádoby (nádob) tak, aby zcela pokryla monovrstvu buněk a umístěte do inkubátoru na 37 ° C po dobu ~ 2 minut.
- Jak připravujete roztok trypsinu EDTA pro buněčnou kulturu?
- Proč se trypsin EDTA používá v buněčné kultuře?
- Jak probíhá subkultivace adherentních buněk za použití samotného trypsinu EDTA a EDTA?
- Jak rozmrazujete trypsin EDTA?
- Může trypsin zabíjet buňky?
- Co můžeme přidat ke kultuře k inhibici trypsinu?
- Může EDTA zabíjet buňky?
- Proč sérum inhibuje trypsin?
- Je EDTA toxický pro buňky?
- Proč používáme trypsin?
- Proč umýváte buňky PBS?
- Proč umýváte buňky PBS před přidáním trypsinu?
Jak připravujete roztok trypsinu EDTA pro buněčnou kulturu?
Přidejte 12 až 15 ml čerstvého buněčného kultivačního média do nové baňky a ekvilibrujte toto médium na vhodné pH a teplotu. Sbírejte buněčnou suspenzi, spočítejte ji nebo rozdělte a rozdělte buňky do nově připravené baňky. Doporučené poměry subkultivace najdete v produktovém listu buněčné linie.
Proč se trypsin EDTA používá v buněčné kultuře?
EDTA působí jako chelatátor kovů, který se přidává do roztoků trypsinu ke zvýšení aktivity. Přidává se EDTA k odstranění vápníku a hořčíku z buněčného povrchu, což umožňuje trypsinu hydrolyzovat specifické peptidové vazby. Hlavním důvodem použití EDTA spolu s trypsinem je odstranění adheze mezi buňkami.
Jak probíhá subkultivace adherentních buněk za použití samotného trypsinu EDTA a EDTA?
Pipetujte trypsin / EDTA na promytou buněčnou monovrstvu s použitím přibližně 1 ml na 25 cm2 povrchu. Otáčením baňky zakryjte monovrstvu trypsinem. Dekantujte přebytečný trypsin. Vraťte baňku do inkubátoru a nechejte ji 2-10 minut.
Jak rozmrazujete trypsin EDTA?
Vyjměte roztok trypsinu / EDTA ze skladu a umístěte jej přes noc při teplotě 2 ° C až 8 ° C. 2. Přeneste láhev do vodní lázně o teplotě 37 ° C a lahvičku jemně promíchejte, aby se promíchaly všechny rozpuštěné látky. Neuchovávejte roztok trypsinu / EDTA při teplotě 37 ° C déle, než je nutné.
Může trypsin zabíjet buňky?
Inkubace buněk s příliš vysokou koncentrací trypsinu po příliš dlouhou dobu poškodí buněčné membrány a buňky zabije.
Co můžeme přidat ke kultuře k inhibici trypsinu?
Trypsin je inhibován sérem, které poskytuje dvojmocné kationty, jako je vápník a hořčík, které hrají roli jak v intracelulárním, tak v mezibuněčném signálním procesu, tj. Při tvorbě CAM, takže sérum se obvykle přidává do nádoby, jakmile se buňky oddělí - to lze potvrdit pozorováním pod mikroskop.
Může EDTA zabíjet buňky?
A. Použijte 5 mM EDTA nebo vyšší POZNÁMKA: příliš mnoho EDTA může zabít vaše buňky b. Accutase a Accumax jsou produkty disociace buněk prodávané společností Innovative Technologies, které mohou pomoci při udržování suspenzí jednotlivých buněk.
Proč sérum inhibuje trypsin?
Ahoj, Trypsin je endopeptidáza, která štěpí bílkoviny. Při trypsinizačním procesu jsou tráveny extracelulární proteiny, což vede k oddělení buněk od dna kultivační nádoby. ... Sérum obsahuje mnoho inhibitorů proteáz, které zastavují trypsin, většinou alfa-1-antitrypsin. Snad to pomůže!
Je EDTA toxický pro buňky?
Při vystavení buněk 100 mikroM Zn- nebo Fe-EDTA nebyla pozorována žádná toxicita, ale stejná koncentrace Cu-EDTA byla stejně toxická jako Na-EDTA. Kontinuální expozice buněčných kultur 5 mikroM Na- nebo Zn-EDTA po dobu až 7 týdnů nepřinesla žádné známky toxicity.
Proč používáme trypsin?
Trypsin je enzym, který nám pomáhá trávit bílkoviny. V tenkém střevě trypsin štěpí bílkoviny a pokračuje v procesu trávení, který začal v žaludku. Může být také označován jako proteolytický enzym nebo proteináza. Trypsin je produkován slinivkou břišní v neaktivní formě zvané trypsinogen.
Proč umýváte buňky PBS?
V buněčné kultuře během rozplývání se PBS je nutné promytí, aby se odstranilo sérum média, aby trypsin byl schopen oddělit buňky od destičky, jiné moudré sérum může inaktivovat trypsin.
Proč umýváte buňky PBS před přidáním trypsinu?
Než jej přidáte k buňkám, musíte promýt médium pro buněčnou kulturu, protože trypsin by také rozložil proteiny, které jsou v médiu přítomny, jako je FCS, což snižuje jeho aktivitu dříve, než se dostane do buněk.
